Abstract

MOTA, Mariana  and  OLIVEIRA, Cristina Moniz. Identificação de genes expressos durante a interacção cv. Florina - V. inaequalis por differential display-Rt-Pcr . Rev. de Ciências Agrárias [online]. 2008, vol.31, n.2, pp.139-147. ISSN 0871-018X.

Para identificar genes especificamente regulados durante a expressão do mecanismo de resistência ao pedrado na macieira cv. Florina, comparou-se o padrão de expressão genética em plantas após inoculação com uma suspensão conidial do fungo Venturia inaequalis, com o padrão em plantas inoculadas com água, por “differential display RT-PCR”. Os produtos das reacções de amplificação resultantes da combinação de um oligodT (dT_VG) com 20 iniciadores decameros de sequência arbitrária foram separados em gel desnaturante de poliacrilamida e detectados com nitrato de prata. 14 fragmentos de cDNA visíveis apenas na amostra derivada de folhas inoculadas com a suspensão, ou em maior abundância nesta amostra, foram extraídos do gel para purificação, reamplificação e clonagem. Três fragmentos foram já sequenciados, revelando uma sequência forte homologia com uma fitoquelatina sintetase vegetal, potencialmente envolvida em respostas a factores de “stress”. A acumulação diferencial deste cDNA em resposta à inoculação será verificada por transcrição-reversa-PCR com iniciadores específicos.

Keywords : differential-display RTPCR; expressão diferencial; Florina; pedrado; fitoquelatina sintetase.

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